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miRNA第一链cDNA合成试剂盒图片
产品货号:
ALH189
中文名称:
miRNA第一链cDNA合成试剂盒
英文名称:
microRNA first-strand cDNA synthesis kit
产品规格:
25T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本试剂盒采用特殊优化预混合miRNA RT Enzyme Mix将Poly(A)加尾和反转录合并为一步完成,简化了操作步骤并提高Poly(A)加尾和逆转录效率,本试剂盒具有可从20pg~2μg的总RNA中有效制备miRNA对应的cDNA第一链。一次合成的cDNA可检测多个microRNA,节约了样品和成本。




本试剂盒基于Poly(A)加尾法原理,首先在miRNA 3'末端加Poly(A)尾,再使用Anchored oligo(dT)-universal tag通用逆转录引物进行逆转录反应,最终生成miRNA对应的cDNA第一链。




组分规格
10×miRNA RT Enzyme Mix50μL
2×miRT Reaction Mix250μL
RNase-free H2O1mL

保存:-20℃


  • 本试剂盒须与miRNA荧光定量PCR检测试剂盒配套使用。
  • 在反应中使用的total RNA必须包含有小分子RNA(miRNA)。此过程也可以使用富集的miRNA,单纯miRNA无法直接用分光光度计定量,建议直接加入2μL~5μL。可根据目的miRNA丰度决定加入量,但是对于低丰度miRNA样品而言(如血清血浆提取物),可直接加入最大体积8μL。



一、miRNA 3'末端进行Poly (A)加尾和逆转录反应(第一链合成)
  • 解冻2×miRNA RT Reaction Mix并混匀,10×miRNA RT Enzyme Mix放于冰中备用,按下表配制反应体系。
    成分用量终浓度
    Total RNAx μLUp to 2μg
    2×miRNA RT Reaction Mix10μL
    miRNA RT Enzyme Mix2μL-
    RNase-free H2O至20μL-
    • 10×miRNA RT Enzyme Mix最后加入。
    • 10×miRNA RT Enzyme Mix非常粘稠,溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失,用前请点甩离心,并且避免吸头外壁沾附损失。
    • 10×miRNA RT Enzyme Mix内酶都是过量的,即使每次按照1.8μL使用,也不影响使用效果。
  • 移液器轻轻混匀上述配制的反应液,短暂离心后在42℃反应60min。
  • 85℃加热5秒钟失活miRNA RT Enzyme Mix。合成的cDNA反应液可放置于-20℃保存,也可以直接进行下游PCR或者荧光定量PCR检测。


二、进行荧光定量PCR
请参考miRNA荧光定量PCR检测试剂盒说明书进行。
  • 使用本试剂盒得到的cDNA模板用于下游PCR或者荧光定量PCR检测时,可以根据实际情况选择使用量,对于特殊的检测体系中,高含量的cDNA模板易导致非特异性扩增,可根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(5~10倍或者100倍)后使用。如果发现有非特异扩增条带,或者融链曲线显示有非特异扩增,往往提示cDNA模板过量,可以尝试将上述cDNA模板稀释几十到几百倍甚至上千倍再使用。

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